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荧光定量PCR/引物合成/EMSA/RT-PCR/ELISA/原位杂交/质粒构建服务——基金/课题整体外包,行业标杆

  • 发布日期:2016-12-13 20:11
  • 有效期至:长期有效
  • 商机区域:全国
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详细说明
服务名称: 荧光定量PCR/引物合成/EMSA/RT-PCR/ELISA/原位杂交/质粒构建服务——基金/课题整体外包,行业标杆
地区: 全国
简介: 实验技术服务
提供商: 威斯腾生物
一、RT-PCR技术简介:
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
二、RTPCR步骤:
1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染
2、第一链cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应
4、琼脂糖上进行凝胶电泳
5、成像分析软件Quantity One进行半定量
三、PCR条件的优化:
PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节,一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2+浓度的调节也非常重要,通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。
 
四、耗材与实验相关仪器:
1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl             2、吸头:1ml、200μl、20μl
3、匀浆管:5ml                                         4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个
5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl                          6、试剂瓶:2个60ml的棕色试剂瓶(广口,带盖)
1个125ml的白色试剂瓶(放无水乙醇)                     7、量筒:50ml、250ml、500ml
8、容量瓶:250ml、500ml、1000ml                        9、试管架:5ml、1.5ml、20μl
10、盐水瓶:250ml、500ml各2个备用,一个装无水乙醇,
另一个装DEPC水
11、铝制饭盒:4个                                      12、塑料小饭盒:1个
13、大瓷缸:2个                                        14、锡泊纸:一卷
15、卷纸:2卷                                          16、三角烧瓶:带盖,稍大
主要仪器设备
Sigma 3-18K高速冷冻离心机             德国Sigma公司
ABI 2720型PCR仪                       美国ABI公司
Bio-Rad PowerPac Basic电泳仪          美国Bio-Rad公司
192型Sub-Cell 电泳槽                  美国Bio-Rad公司
ZKU-B120超低温冰箱                   中国生命科技股份有限公司
Bio-Rad 全自动凝胶成像系统           美国Bio-Rad公司
Millipore 超纯水系统                 美国MILLIPORE公司
微量移液枪                           Eppendorf公司
Bio-Rad核酸蛋白测定仪                美国Bio-Rad公司
五、实验要求:
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的总RNA或DNA(大于5ug/样本)。如是如织:100-200mg
2、请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。
3、请提供详细背景资料:DNA/RNA来源,丰度。
4、在实验前请您要确保目的基因可以表达,并确保您提供的实验信息的准确性。
四、服务承诺:
1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。    
2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。
3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。
五、结果提供:
1、实验详细步骤,和相关数据。
2、完整的实验报告实验图片(含软件分析结果)
六、优惠:
1、引物合成,费用全免。
2、RNA抽提费用全免。
3、免费提供RNA保护试剂,上门服务取样。
七、完成时间:
接到样本1月以内。
八、服务流程:
1、 讨论分析实验方案
2、 确定服务内容
3、 签订服务合同
4、 进行实验,定期向客户反馈
5、 整理实验报告
6、 完成合同内容
7、 后续实验服务,进一步合作
 
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